• 产品品牌： REAGEN
• 产品货号： RND99131
• 产品规格： 48/96T
• 产品适用： 适用于利福平检测
• 产地来源： 中国深圳
• 试剂盒组成： 检测试剂、说明书
• 保质期： 12个月

本测试盒用竞争免疫分析法定量测定细胞培养液中的利福平。该测试盒反应孔可拆卸，可测单份样品，也可测多份样品。定量分析时需有含450nm波长的微孔板酶标仪。

1 概要

利福平（Rifampicin）一种广谱抗生素药物，对结核杆菌有较强抗菌作用，对革兰氏阳性或阴性细菌、病毒等也有疗效，主要用于治疗结核病、脑膜炎和金黄色葡萄球菌感染，外用可治疗沙眼等。

2 测定原理

本测试盒利用固相酶联免疫吸附原理，采用间接竞争ELISA法进行测定。用抗原包被微孔板，加入利福平标准品或样品、抗利福平酶标单克隆抗体进行免疫反应后，将未与包被抗原结合的抗体洗去；再加入酶标记的抗鼠IgG抗体孵育，加入显色液，经终止液终止后，用酶标仪在450nm处测定OD值。

3 提供的物品

微孔板

6个浓度的标准溶液（各0.5mL）

标准1：0ng/mL ……………………………………………………………........直接使用

标准2：1.0ng/mL ………………………………………………………................直接使用

标准3：2.0ng/mL ……………………………………………………........…........直接使用

标准4：5.0ng/mL ……………………………………………………........…........直接使用

标准5：20.0ng/mL ………………………………………………………........直接使用

标准6：50.0ng/mL …………………………………………………….......….直接使用

抗体溶液(6mL) …………………………………………………………………直接使用

酶标物(12mL) …………………………………………………………………直接使用

显色液(12mL) …………………………………………………………………直接使用

终止液(6mL) ………………………………………………………………………直接使用

10X浓缩洗液(30mL) ……………………………………………………………稀释使用

4 盒中未提供，需自备物品

微孔板酶标仪（含450nm）、去离子水或蒸馏水。

5 操作者注意事项

终止液为0.5M硫酸，避免接触皮肤。每次加样后立即将所有试剂放回2~8 ℃。每步加样时间应控制在5min内。孵育过程中应避光。不要使用过期试剂盒。不要交叉使用不同批号的试剂盒中的试剂。

6 储存条件

保存试剂盒于2~8℃。不要冷冻

显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

将不用的微孔板放进原铝箔袋中，置2~8℃保存。

7 试剂变质的标志

标准1的吸光度值小于0.5个单位（A_450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。

8 样品处理 

----细胞培养液无需前处理，直接进行测定

9 酶免疫分析程序

----浓缩洗液为10倍浓缩液，使用时与去离子水或蒸馏水按体积比1:9稀释后使用。

----取所需数量的板条插入微孔架，记录样品及标准的位置。

----加入50mL标准品或处理好的样品到微孔，每个标准和样品必须使用新的吸头。

----加入50mL利福平单克隆抗体溶液到每个微孔中（注意移液器管尖不要接触到孔中的液体，避免交叉污染），37℃孵育90min。

----甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。

----每孔加入酶标物100mL，37℃孵育60min。

----甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。

----每孔加入显色液100mL，37℃孵育15 min。

----每孔加入终止液50mL，立即用酶标仪在波长450nm处测定吸光度值（OD值）。

10 样品浓度计算

以标准溶液OD值与标准1的OD值的比值为纵坐标，所对应标准溶液浓度（ng/mL）的对数值为横坐标，制作标准曲线。根据样品OD值与标准1的OD的比值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为利福平浓度的对数值，求得反对数即为测定液中利福平浓度C（ng/mL）

11 主要技术指标及参数

11.1  最低检出浓度1.0 ng/mL。 

11.2  加标回收率在70-120%，条内变异系数＜10%，条件变异系数＜15%。